- Зразки для об’єднання спочатку оцінюють шляхом вимірювання поглинання ультрафіолетового (УФ) світла при 260 нм. (не показано). Потім зразки розводять до 40–80 нг мкл.
- −1. та їх концентрації ДНК.
- повторно оцінити за допомогою флуориметрії. Зразки остаточно розводять до 4 нг мкл. −1.
- , повторно кількісно та скориговано. при необхідності.
Упаковка та доставка Помістіть зразок ДНК або РНК у мікроцентрифужну пробірку на 1,5 або 2 мл, що загвинчується, і закрийте парафільмом. Упакуйте пробірку в морозильну камеру, конічний флакон на 50 мл або іншим способом, щоб захистити її від розбивання. Помістіть у термостабільну коробку для транспортування. Ми рекомендуємо товщину пінополістиролу не менше 1,5 дюйма.
Pool-seq — це техніка секвенування, яка забезпечує економічно ефективний підхід до кількісної оцінки генетичної варіації в популяції. Це передбачає об’єднання кількох окремих зразків ДНК разом і секвенування їх разом.
Зокрема, об'єднання зменшує внутрішньогрупову варіабельність, що дозволяє виявити біологічні ефекти за допомогою невеликого розміру вибірки (кількість пулів), отже, менші витрати на підготовку бібліотеки та секвенування.
Об'єднання ДНК є практичний спосіб зменшити вартість широкомасштабних досліджень асоціацій для виявлення локусів сприйнятливості до поширених захворювань. Об’єднання дозволяє вимірювати частоти алелів у групах індивідуумів за допомогою набагато меншої кількості реакцій ПЛР і аналізів генотипування, ніж це використовується при генотипуванні індивідуумів.
Об'ємне об'єднання: З’єднайте рівні об’єми кожної нормалізованої бібліотеки в мікроцентрифужну пробірку та обережно прокапайте вміст піпеткою вгору та вниз 10 разів, щоб ретельно перемішати. Тепер нормалізований пул готовий до денатурації та секвенування.