Принцип поділу Диференціальна міграція клітин під час центрифугування призводить до утворення шарів, що містять різні типи клітин: • Нижній шар містить еритроцити, які були агреговані Ficoll PM400 і тому повністю осідають у Ficoll-Paque
мультимедійний шар.
лімфоцити, базофіли та тромбоцити залишаються на верхній поверхні розділу Ficoll-Hypaque, тоді як більш щільні еритроцити та нейтрофіли проходять через Ficoll-Hypaque та осаджуються внизу. Мононуклеарні клітини обережно збирають, а решту Ficoll-Hypaque аспірують.
Принцип розділення суміші залежить від властивості або природи складових речовин, присутніх у суміші. Деякі методи відокремлення обговорюються нижче: магніт, наприклад, можна використовувати для відділення залізних шматочків від піску, оскільки залізо притягує магніт.
Повідомляється, що центрифугування в градієнті щільності є інструментом для відділення бактерій від харчових матриць. Основним принципом є на основі зменшення щільності суспензійного розчину та міграції мішеней до рівноважної частини пробірки із зразком під час центрифугування.
Задіяні ранні методи відділення лімфоцитів від інших типів клітин крові змішування крові з деяким агентом агрегації еритроцитів, що призводить до злипання еритроцитів і осідання на дні пробірки. Потім лімфоцити можна зібрати з верхньої частини пробірки (1, 2).
Основний протокол ізоляції PBMC з використанням центрифугування в градієнті густини. Найпоширеніший метод ізоляції PBMC включає використання середовища з градієнтом щільності (наприклад, Ficoll™ або Lymphoprep™) і центрифугування. Цей метод використовує різницю в щільності між клітинами крові та середовищем із градієнтом щільності.
Тому що еритроцити і гранулоцити набагато більш крихкі до заморожування і розморожування, виділення PBMC є звичайною передумовою для кріоконсервації клітин крові; і найпоширенішим методом виділення PBMC є центрифугування в градієнті щільності з використанням Ficoll-Hypaque, високомолекулярного розчину вуглеводів.